引物(wù)最好在模闆 cDNA 的(de)保守區(qū)内設計,保守區(qū)是不同物(wù)種同一基因的(de)相同序列DNA 序列。引物(wù)長(cháng)度一般在15 ~ 30bp之間。引物(wù)長(cháng)度常用(yòng)的(de)是18 ~ 27bp,過長(cháng)會導緻其延伸溫度大(dà)于74℃,不利于PCR反應。
本著(zhe)保密原則,測序樣本我們會爲您保留一個(gè)月(yuè),所以如果想加測需要在一個(gè)月(yuè)内進行,否則需要重新送樣。
導緻該情況的(de)因素較多(duō),如同一物(wù)種,在不同的(de)種族或個(gè)體之間,其基因序列可(kě)能會存在差異。另外,PCR過程中的(de)錯配也(yě)是因素之一。我們提供的(de)結果是客戶樣品序列的(de)真實結果,因此無法保證與參考序列完全一緻,請理(lǐ)解。
PCR反應過程中會出現錯配現象,這(zhè)些錯配分(fēn)布在PCR産物(wù)的(de)不同位置,所以我們得(de)到的(de)PCR産物(wù)是許多(duō)攜帶不同位置錯配片段的(de)混合物(wù)。PCR産物(wù)直接進行測序
一般情況下(xià),如果序列較長(cháng),得(de)到的(de)測通(tōng)序列都是拼接的(de)結果,拼接的(de)部分(fēn)是第一個(gè)反應的(de)末端和(hé)第二個(gè)反應的(de)前端,這(zhè)一部分(fēn)往往會有雜(zá)帶,我們會以信号好的(de)爲主,信号弱的(de)作爲參考,但也(yě)不是絕對(duì)的(de)。
基因組中通(tōng)常存在一些不明(míng)原因的(de)複雜(zá)結構,如回文序列和(hé)發夾結構等,這(zhè)些結構的(de)存在會導緻信号的(de)突然減弱或中斷;另一種情況是DNA堿基排列并沒有異常,而是DNA整體出現複雜(zá)的(de)結構,這(zhè)樣将導緻測序根本無法進行。