原因一：這(zhè)可(kě)能是因爲您在構建載體的(de)時(shí)候插入片段是非定向的(de)，這(zhè)種情況一般在T/A克隆的(de)時(shí)候比較常見。

原因二：如果您指定的(de)正向測序引物(wù)距離克隆位點較近，我們通(tōng)常改用(yòng)距離克隆位點較遠(yuǎn)的(de)反向引物(wù)進行測序，所以得(de)到的(de)測序結果與您的(de)預期方向是不一緻的(de)，這(zhè)種情況下(xià)，您隻需用(yòng)Chromas看圖軟件把圖翻轉過來(lái)，就可(kě)以得(de)到正向序列。